Archivos de Laboratorio Clínico : Técnica de Gota gruesa

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO

industrial y de servicios No.199

DESARROLLO DE TÉCNICAS PARASITOLOGICAS

3º Semestre

Laboratorio Clínico

''Técnica de Gota gruesa''

FECHA: 05/10/2018 GRUPO: 3º DV EQUIPO:1

·INTRODUCCIÓN

La técnica de gota gruesa es rutinaria y consiste en una muestra de gota de sangre, la cual se constituye de varias capas de glóbulos rojos que han sido deshemoglobinizados y se colorean con Giemsia o Wright.

La concentración de eritrocitos facilita la detección de parásitos, ya que pueden estar presentes en su interior en bajas densidades. Con esta gota gruesa de sangre se prepara un frotis de capa delgada, el cual se fija con metanol y puede ser teñido con Giemsia o Wright, lo que favorece la identificación y observación de las características morfológicas de los parasitos en los glóbulos rojos del Plasmodium y Trypanosoma cruzi.

OBJETIVO

El alumno debe manejar la técnica de gota gruesa desde una buena toma de muestra para diagnosticar parásitos del tipo del Plasmodium o Trypanosoma que se encuentren en la sangre, apoyándose con la realización de extensión de frotis y técnica de tinción, mediante el desarrollo de una práctica de laboratorio y diagnosticar si hay paludismo o tripanosomiasis.

FUNDAMENTO

Las técnicas en que se basan las tinciones hematológicas hacen uso de colorantes. Éstos interactúan con los componentes celulares dispuestos a modo de frotis sanguíneo sobre un portaobjetos. Los colorantes son sustancias capaces de fijarse selectivamente según su afinidad química.

Las tinciones hematológicas se pueden definir como el conjunto de técnicas necesarias para teñir y diferenciar los distintos componentes celulares de la sangre. Estos componentes conforman la fracción forme de la sangre, y gracias a las tinciones se pueden diferenciar en un microscopio óptico.

Un colorante tipo Romanowsky está basado en el uso de una mezcla formada por un colorante ácido (eosina) y uno o varios colorantes básicos (azul de metileno, azur A, azur B y azur C). Las tinciones que se realizan con este tipo de colorante se denominan tinciones panópticas o tinciones tipo Romanowsky.

La tinción de Wright y Giemsa están catalogadas como tinciónes tipo Romanowsky. Del mismo modo que su colorante, que da nombre a la tinción, está catalogado también como colorante tipo Romanowsky.

MATERIAL *REACTIVOS

- Lanceta desechable estéril - Sol. Colorante de Wright

- 2 portaobjetos - Sol. Amortiguadora

- Cuba de tinción

- Piceta

- Microscopio

TOMA DE MUESTRA: PUNCIÓN CAPILAR

Limpieza de la zona de trabajo con alcohol.

Limpiar y desinfectar la zona de punción al 70% y dejar secar.

Puncionar con lanceta estéril la zona lateral y presionar para obtener la gota de sangre, eliminar la primera gota con gasa estéril y tomar la segunda.

PREPARACIÓN DE FROTIS.

Colocar la segunda gota en el centro de un portaobjetos.

Con el borde regular de un portaobjetos limpio, se practica un frotis sanguíneo, colocándolo en un Angulo de 45° en relación al primero y deslizándolo derecha a izquierda en un solo movimiento firme y uniforme.

Con la punta del segundo portaobjetos, extiende la gota de sangre hasta formar un cuadro de aproximadamente 1 cm., por lado, se deja secar.

Se coloca el frotis en la cuba sobre el soporte para tinciones.

Se cubre con el colorante de Wright durante 1 min.

Sin escurrir se cubre con solución amortiguadora de Wright durante 7 min.

Se lava con agua corriente durante 1 min y se deja secar a temperatura ambiente.

Se le agrega una gota de aceite de inmersión antes de ponerlo en observación al microscopio. (Se observa con el objetivo de inmersión).

Técnica de Wrigth

Se coloca el frotis seco en el puente de varillas de vidrio y se añade el colorante de Wrigth con un gotero, en cantidad necesaria, para cubrir la preparación durante 3 min.

Agregar solución buffer de fosfatos de pH 7.0 en la misma cantidad que el colorante dejándose actuar de 1-5 min.

Se lava con agua corriente.

Se deja secar y se observa al microscopio en objetivo de inmersión. (añadir una pequeñísima gota de aceite de inmersión).

Técnica de Giemsa

Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.

Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.

Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.

Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.

Decantar para eliminar el metanol.

Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída a 1/10 (una gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante 25 minutos.