CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO
industrial y de servicios No.199
DESARROLLO DE TÉCNICAS PARASITOLOGICAS
3º Semestre
Laboratorio Clínico
"Técnica de Ziehl-Neelsen "
FECHA: 28/09/2018 GRUPO: 3º DV EQUIPO:1
INTRODUCCIÓN:
La tinción de ZIEHL-NEELSEN es
útil para visualizar quistes de protozoos intestinales que tienen la propiedad
de ser Acido-Alcohol resistente.
¿Por qué se llama
tinción de ZIEHL-NEELSEN?
El nombre de este procedimiento
de microbiología hace referencia a sus autores; el bacteriólogo Franz Ziehl y
el patólogo Friedrich Neelsen.
OBJETIVOS:
Diferenciar las bacterias ácido-alcohol resistentes (AAR) de las que no lo son. Usando, para ello, la tinción diferencial de Ziehl-Neelsen.
FUNDAMENTO
El fundamento de esta técnica
de tinción se basa en las propiedades de la pared celular d estos microorganismos.
La pared está formada por un tipo de ácidos grasos llamados ácidos micolicos;
estos se caracterizan por presentar cadenas muy largas.
En la
tinción Ziehl Neelsen se utiliza el compuesto fenólico carbol fucsina, un
colorante básico. Este tiene la capacidad de interactuar con los ácidos grasos
de la pared celular, la cual es de textura cerosa a temperatura ambiente.
El ácido que se usa posteriormente
sirve para decolorar las células que no fueron teñidas porque su pared no era
lo suficiente afín al colorante; por lo tanto, la fuerza del decolorante ácidos
es capaz de eliminar el colorante acido. Las células que resisten a esta
decoloración se llaman Acido-Resistentes.
MATERIALES:
ü
Muestra de heces fecales
ü Portaobjetos
MATERIAL
DE IDENTIFICACION:
ü Aplicador
ü Mechero
ü Metanol
REACTIVOS:
ü
Agua corriente
ü
Fucsina fenicada
ü
Alcohol-Acido Orth
ü
Azul de metileno Loeffler
PREPARACION DE LA MUESTRA
En general, una muestra de
espécimen puede ser colocada directamente sobre el portaobjetos aplicando las
recomendaciones específicas, recordando siempre tener una preparación delgada y
homogénea.
Las películas secadas al aire son fijadas con calor suave sobre la
flama de un mechero y luego pasadas a través de ella. Debe terse cuidado para
evitar el calor excesivo, que puede alterar la forma bacteriana.
PREPARACIÓN DE
REACTIVOS
Los reactivos que se incluyen en este equipo
están preparados para ser usados directamente.
PROCESO:
Ø Etiquetar
muestra y rotular portaobjetos
Ø Tomar una
pequeña porción de heces (que contenga moco).
Ø Realizar una
extensión “FINA” evitando “ESTRIADO”
Ø Dejar secar.
Ø Fijar con
metanol o con mechero 2 o 3 veces rápido y dejar enfriar.
Ø Fijado el
frotis, cubrir toda la laminilla con el colorante Fucsina Fenicada Kinyoun. Se
tiñe durante 1 a 5 minutos (método en caliente).
Ø Lavar en
agua caliente, sacudiendo para eliminar los restos de agua.
Ø Cubrir el portaobjetos con el Azul de Metileno
durante 30 a 90 segundos.
Ø Lavar
repetidas veces con agua corriente.
Ø Decolorar
con Acido alcohol durante 20 a 30 segundos.
Ø Lavar con
agua corriente.
Ø Secar y
observar al microscopio. Con el objetivo de inmersión.
CUESTIONARIO
¿Qué significa
que sea un ácido-alcohol resistente?
Es la propiedad física de
algunas bacterias a la resistencia a la decoloración de la fucsina básica
(rojo) la cual penetra en la célula por acción del fenol y el calor.
¿Qué reacción
tiene la fijación a mechero?
Preserva
la morfología externa de los microorganismos pero no las estructuras externas.
Función de Azul
metileno:
(CLORURO DE METILTIONINA) colorante orgánico que se usa para tratar
una enfermedad llamada metahemoglobinemia.
Función de
Fucsina:
Tiñe
a las bacterias Gram (-) de rojo
Otros usos de la
tinción ZIEHL NEELSEN
Ø Phylum
Apicomplexa (coccidios intestinales)
Ø Diagnóstico
de la tuberculosis
Ø Diferencia a
las bacterias en 2 grupos:
1. Aquellas capaces de resistir a la
decoloración alcohol-
2. Aquellas no resistentes
CYLOSPORA
Parásito que puede afectar el tracto digestivo provocando diarrea.
ISOSPORA
Es un género de potistas del
filo de Apicomplexa que causa la enfermedad de isosporiasis en los seres
humanos y animales. Es un coccidio formador de quistes que se transmite por vía
fecal y oral. Infecta células
epiteliales del intestino delgado y es la causa más común de cocciodiosis en
perros y gatos.
RESULTADOS:
Al utilizar el ácido-alcohol sobre la preparación
causamos la muerte de diversas bacterias y de microorganismos; por lo que es
muy difícil percibir un parasito vivo, dejando un campo limpio de observación.
BIBLIOGRAFIA.
Ø Apurba, S. & Sandhya, B. (2016). Essentials of practical
Microbiology (1st ed.). Jaype Brothers Medical Publishers.
Ø Bauman, R. (2004). MICROBIOLOGY with Diseases by Body
System (4th ed.). Pearson Education. Inc.
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